Quel est le substrat idéal pour la réalisation de vos analyses ELISA ?

Utilisations et avantages du substrat TMB

Uptima, la marque dédiée d’Advion Interchim Scientific, propose à cet effet plusieurs substrats, 4 formulations non précipitantes pour la technique majeure d’analyse qu’est l’ELISA (sur microplaque), ainsi qu’une formulation précipitante pour le Blotting ou l’IHC. Retrouvez ces différents produits en fin d’article.

Toutes ces formulations assurent :

• Performance : haute sensibilité de détection
• Fiabilité : lots hautement qualifiés et reproductibles
• Praticité : prêt-à-l ’emploi – Mono-Solution
• Stabilité :  de 24 mois à 48 mois selon les formulations

En ELISA, le TMB produit dans le bleu un signal un peu supérieur à l’OPD (lui-même plus fort que l’ABTS) en mode cinétique continu comme à point final stoppé (données non montrées). L’ajout d’un acide qui arrête la réaction HRP/TMB décuple cet avantage en augmentant les densités optiques d’un facteur 3 à 4. Le TMB est ainsi le substrat colorimétrique de choix pour les tests les plus sensibles et est plébiscité par les scientifiques pour une utilisation aussi bien en routine qu’en diagnostique.

Test comparatif des substrats TMBs Uptima et de TMBs concurrents

Nous avons comparé 4 TMBs Uptima à 5 concurrents, dans un protocole d’ELISA direct.

Figure 1 : Test ELISA Direct avec un anticorps anti IgG de lapin marqué à l’HRP révélé par 9 substrats TMB pendant 30 min à 37°C avec stop acide (H₂SO₄). La densité optique (OD) des puits mesurés à 450 nm est reportée pour la dilution d’ac de 1/120 000. Les témoins négatifs (sans ac-HRP) sont tous <0,053.

Le TMB Uptima Friendly #664700 donne le signal le plus fort de tous les TMB testés, autorisant d’utiliser des anticorps à des dilutions très élevées (ici anticorps de lapin marqué HRP dilué 1/120 000). Il assure une sensibilité de détection maximale avec un ratio signal/bruit de fond inégalé, meilleure encore que notre TMB Standard #66478, notre formulation originelle, qui reste excellent. Tout comme notre TMB Wise #66477, il est de plus conforme aux normes de transport non déclaré et REACH XVII. Pour une solution garantie sans solvant (‘100% aqueux’), vous pouvez préférer notre TMB Aqueous #S0818  dont la sensibilité est égale voire supérieure aux concurrents homologues testés (M3 et L).

Pour aller plus loin

Le choix d’un substrat optimal ne s’arrête pas à sa sensibilité de détection, son faible bruit de fond ou son prix !

Par exemple, la stabilité des lots d’un substrat, la gamme dynamique mais aussi la reproductibilité des signaux d’un lot à l’autre, sont des paramètres importants que cela soit pour une utilisation R&D ou en contrôle qualité d’un diagnostic. Mais au-delà du choix du substrat TMB, certaines modalités opératoires du protocole ELISA, comme en screening HTS, peuvent conforter la précision et la robustesse des tests réalisés.

Contactez notre chef produit pour trouver le substrat TMB idéal de votre application, de la R&D au test à haut débit, du contrôle en fabrication au diagnostic. Nos spécialistes d’applications sont aussi à votre disposition pour toute optimisation de vos immunoessais (bruit de fond ; amplification du signal ; de choix de substrat pour votre lecteur de plaque…).